各省、自治區(qū)、直轄市及新疆生產(chǎn)建設(shè)兵團(tuán)應(yīng)對(duì)新冠肺炎疫情聯(lián)防聯(lián)控機(jī)制（領(lǐng)導(dǎo)小組、指揮部）：
　　為科學(xué)規(guī)范指導(dǎo)開(kāi)展農(nóng)貿(mào)（集貿(mào)）市場(chǎng)新冠病毒環(huán)境監(jiān)測(cè)工作，深入開(kāi)展病毒溯源和疫情防控，我們組織編制了《農(nóng)貿(mào)（集貿(mào)）市場(chǎng)新型冠狀病毒環(huán)境監(jiān)測(cè)技術(shù)規(guī)范》。現(xiàn)印發(fā)給你們，請(qǐng)參照?qǐng)?zhí)行。

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國(guó)務(wù)院應(yīng)對(duì)新型冠狀病毒肺炎
疫情聯(lián)防聯(lián)控機(jī)制綜合組
（代章）
2020年7月30日

　?。ㄐ畔⒐_(kāi)形式：主動(dòng)公開(kāi)）

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農(nóng)貿(mào)（集貿(mào)）市場(chǎng)新型冠狀病毒環(huán)境監(jiān)測(cè)
技術(shù)規(guī)范

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　　農(nóng)貿(mào)（集貿(mào)）市場(chǎng)是新冠肺炎疫情防控的重點(diǎn)場(chǎng)所，加強(qiáng)對(duì)農(nóng)貿(mào)（集貿(mào)）市場(chǎng)新冠病毒環(huán)境監(jiān)測(cè)，對(duì)于深入開(kāi)展病毒溯源和疫情防控意義重大。為科學(xué)規(guī)范指導(dǎo)開(kāi)展農(nóng)貿(mào)（集貿(mào)）市場(chǎng)新冠病毒環(huán)境監(jiān)測(cè)工作，特制定本技術(shù)規(guī)范。
　　一、監(jiān)測(cè)對(duì)象
　　監(jiān)測(cè)重點(diǎn)為具備區(qū)域輻射能力的大型農(nóng)貿(mào)（集貿(mào)）市場(chǎng)，特別是包括冷凍、冷藏功能的肉類和海鮮水產(chǎn)交易攤位，或者存在潮濕、密閉空間的市場(chǎng)。
　　二、監(jiān)測(cè)內(nèi)容
　　（一）市場(chǎng)內(nèi)重點(diǎn)攤位的設(shè)施、用具表面病毒檢測(cè)。重點(diǎn)對(duì)攤位臺(tái)面、面板、地面、把手，以及各種制作和使用器具等表面，包括脫毛或切割機(jī)械、刀具等，采集拭子樣本。
　　（二）市場(chǎng)內(nèi)重點(diǎn)攤位從業(yè)人員咽拭子、衣物表面、手部病毒檢測(cè)。對(duì)處于工作狀態(tài)的從業(yè)人員手部表面，采集拭子樣本。
　　（三）市場(chǎng)內(nèi)重點(diǎn)攤位存放食品的冰箱、冷藏柜內(nèi)部表面病毒檢測(cè)。對(duì)儲(chǔ)藏食物過(guò)程中經(jīng)常觸及的冰箱、冷藏柜內(nèi)表面，采集拭子樣本。
　?。ㄋ模┦袌?chǎng)內(nèi)銷售的肉、禽類和海鮮水產(chǎn)類食品的病毒檢測(cè)。對(duì)市場(chǎng)內(nèi)銷售的食品應(yīng)當(dāng)按照無(wú)包裝食品和有包裝食品加以區(qū)分，其中有包裝類食品重點(diǎn)是需要冷藏運(yùn)輸?shù)娜?、禽類和海鮮水產(chǎn)類食品，采集拭子樣本。
　　（五）市場(chǎng)內(nèi)排水系統(tǒng)中污水的病毒檢測(cè)。重點(diǎn)包括市場(chǎng)內(nèi)海鮮水產(chǎn)、肉禽類產(chǎn)品攤位來(lái)源的污水，采集拭子樣本或污水樣本。
　?。┦袌?chǎng)內(nèi)公共空間中人員接觸較多的部位，包括主要進(jìn)出口的電梯按鈕、樓梯扶手、門(mén)把手表面，茶水間、衛(wèi)生間等公用設(shè)備設(shè)施表面，潮濕的公共通道和衛(wèi)生間地面、墩布池等采集拭子樣本。
　　（七）市場(chǎng)內(nèi)經(jīng)常性跨區(qū)域移動(dòng)的工具或物品，包括垃圾車、垃圾桶、墩布等清潔工具，轉(zhuǎn)運(yùn)物品的拖車等，采集拭子樣本。
　?。ò耍┦袌?chǎng)內(nèi)工作人員聚集、通風(fēng)不良的環(huán)境，包括辦公室、工具間、休息間、局部交易環(huán)境等環(huán)境拭子及氣溶膠樣本。
　　三、樣本采樣
　　（一）樣本要求。
　　1.從業(yè)人員咽拭子、手部、衣物和其他物體表面拭子樣本：要求用病毒采樣管中的病毒保存液，充分浸潤(rùn)采樣棉簽后，對(duì)擬采集的手部或物體（包括公共通道的地面）的表面重復(fù)涂抹、涮洗3次以上。同時(shí)要滿足對(duì)采樣對(duì)象表面，進(jìn)行多點(diǎn)分布式采樣。
　　2.食品表面拭子樣本：食品樣本不可直接進(jìn)行采集，應(yīng)當(dāng)首先將擬采集的食品小心分離，并存放于潔凈采樣袋后，再進(jìn)行拭子樣本的采集。要求用病毒采樣管中的病毒保存液，充分浸潤(rùn)采樣棉簽后，對(duì)擬采集食物樣本的表面重復(fù)涂抹、涮洗3次以上。同時(shí)要滿足對(duì)樣本表面，進(jìn)行多點(diǎn)分布式采樣。
　　3.污水樣本：按照市場(chǎng)內(nèi)排水系統(tǒng)分布情況，選取2-3處污水采樣位置，重點(diǎn)為內(nèi)部管網(wǎng)匯集處、水流方向的下游或與市政管網(wǎng)的連接處。采集拭子樣本要求，用采樣棉簽浸入污水中，使其吸附污水并在采樣管中對(duì)涮洗3次以上。采集污水樣本要求，用聚乙烯塑料瓶收集30-500mL污水水樣；大于500mL體積的污水采集可以使用聚乙烯塑料桶或現(xiàn)場(chǎng)水樣專用富集設(shè)備。同時(shí)要滿足對(duì)污水采樣位置，進(jìn)行多點(diǎn)分布式采樣。
　　4.動(dòng)物樣本：對(duì)于活體動(dòng)物，可分別用采樣棉簽采集其體表拭子、口咽拭子和肛拭子，也可以采集其排泄物或分泌物樣本，并在記錄單上進(jìn)行相應(yīng)記錄。對(duì)于以經(jīng)過(guò)剝皮等處理的動(dòng)物樣本，分別用棉簽采集其體表和體腔拭子樣本，要求用病毒采樣管中的病毒保存液，充分浸潤(rùn)采樣棉簽后，對(duì)擬采集食物樣本的表面重復(fù)涂抹、涮洗3次以上。同時(shí)要滿足對(duì)樣本表面，進(jìn)行多點(diǎn)分布式采樣。
　　5.其他器具：籠具或魚(yú)缸等裝運(yùn)、養(yǎng)殖動(dòng)物的容器，需首先觀察或了解該容器具體存放、養(yǎng)殖過(guò)的動(dòng)物類型，采集容器內(nèi)壁拭子樣本或內(nèi)容物液體樣本。
　　6.人員聚集、通風(fēng)不良的局部交易區(qū)域、辦公室、休息間等環(huán)境采集氣溶膠樣本。
　?。ǘ┎蓸臃椒?。
　　1.采樣周期：對(duì)重點(diǎn)大型集貿(mào)市場(chǎng)（特別是銷售生鮮類產(chǎn)品的市場(chǎng)）按照1次/周，對(duì)其余需要監(jiān)測(cè)的集貿(mào)市場(chǎng)按照1次/月的頻次進(jìn)行病毒監(jiān)測(cè)。
　　2.采樣實(shí)施：現(xiàn)場(chǎng)采樣由兩名以上的工作人員參與完成，采樣時(shí)應(yīng)當(dāng)穿戴防護(hù)服、防護(hù)口罩、鞋套和醫(yī)用一次性手套。采樣過(guò)程需開(kāi)啟現(xiàn)場(chǎng)采樣視頻記錄設(shè)備。
　　3.采樣裝備：病毒采樣箱、病毒采樣管、氣溶膠采集器、樣品記錄單、手消設(shè)備、潔凈采樣袋、冰袋、高危險(xiǎn)生物樣本轉(zhuǎn)運(yùn)箱和生物安全垃圾袋等。
　　4.采樣記錄：樣本信息應(yīng)當(dāng)包括樣本采集的采樣時(shí)間、地點(diǎn)、集貿(mào)市場(chǎng)名稱、攤位編號(hào)、采樣類型、樣本編號(hào)以及采樣人等信息。
　　5.采樣操作：采樣開(kāi)始前，要求穿戴防護(hù)服、口罩、鞋套和手套等個(gè)人防護(hù)用品進(jìn)入采樣現(xiàn)場(chǎng)，并使用手消進(jìn)行手部消毒。拭子樣本采樣過(guò)程中，采樣棉簽只能接觸當(dāng)前采集的樣本，避免觸碰到其他物體。污水樣本采集前，先充分?jǐn)噭?，然后取樣。污水分三層以上，不能攪勻時(shí)，可按各層量的多少的比例分層取樣。氣溶膠樣本采集使用氣溶膠采集器，設(shè)定采集高度、空氣通量和采集時(shí)間，進(jìn)行氣溶膠采集，將采集后的吸收液或?yàn)V膜放置在特定的低溫容器進(jìn)行轉(zhuǎn)運(yùn)。采樣結(jié)束后，清理廢棄物后離場(chǎng)。
　　6.樣品轉(zhuǎn)運(yùn)：采集樣品連同采樣記錄單應(yīng)當(dāng)在24小時(shí)內(nèi)運(yùn)送至當(dāng)?shù)刂付ǖ牟《颈O(jiān)測(cè)機(jī)構(gòu)進(jìn)行檢測(cè)，樣本建議冷藏存放于高危險(xiǎn)生物樣本轉(zhuǎn)運(yùn)箱中，并由專人、專車進(jìn)行轉(zhuǎn)運(yùn)。
　　四、檢測(cè)
　　（一）樣本分裝和保存。
　　1.樣本分裝：標(biāo)本采集后應(yīng)當(dāng)在生物安全二級(jí)實(shí)驗(yàn)室生物安全柜內(nèi)分裝，但個(gè)人防護(hù)裝備參照生物安全三級(jí)實(shí)驗(yàn)室的防護(hù)要求。所有采集對(duì)環(huán)境標(biāo)本應(yīng)當(dāng)分裝到大小適合的帶螺旋蓋內(nèi)有墊圈、耐冷凍的樣本采集管里，按照1000ul/管進(jìn)行分裝。容器(采集管)外注明樣本編號(hào)、種類及采樣日期。用于后續(xù)核酸提取和病毒分離等實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)工作。
　　2.樣本保存：用于病毒分離和核酸檢測(cè)的標(biāo)本應(yīng)當(dāng)盡快進(jìn)行檢測(cè)，能在24小時(shí)內(nèi)檢測(cè)的標(biāo)本可置于4℃保存；24小時(shí)內(nèi)無(wú)法檢測(cè)的標(biāo)本則應(yīng)當(dāng)置于-70℃或以下保存（如無(wú)-70℃保存條件，則于-20℃冰箱暫存）。
　?。ǘ┪鬯畼忧捌谔幚?。使用離心技術(shù)去除污水中雜質(zhì)。先打開(kāi)低溫離心機(jī)，待溫度降至4℃左右，建議4654離心力離心30分鐘，取上清。再使用膜吸附技術(shù)或超濾技術(shù)進(jìn)行上清液的濃縮。
　　（三）核酸提取。新型冠狀病毒的常規(guī)檢測(cè)方法是通過(guò)實(shí)時(shí)熒光RT-PCR鑒定。任何新型冠狀病毒的檢測(cè)都必須由經(jīng)過(guò)相關(guān)生物安全及技能培訓(xùn)的人員進(jìn)行操作。對(duì)已經(jīng)滅活的樣本，應(yīng)當(dāng)在生物安全二級(jí)（BSL-2）實(shí)驗(yàn)室內(nèi)，使用自動(dòng)化核酸提取儀，配套核酸提取試劑盒進(jìn)行病毒核酸的提取。核酸提取后，應(yīng)當(dāng)將核酸產(chǎn)物進(jìn)行分裝，用于后續(xù)核酸實(shí)時(shí)熒光定量（RT-PCR）及深度測(cè)序。核酸提取操作參考相關(guān)廠家試劑盒說(shuō)明書(shū)開(kāi)展。
　?。ㄋ模?shí)時(shí)熒光定量PCR。在BSL-2實(shí)驗(yàn)室中對(duì)所有已提取的核酸樣本，應(yīng)當(dāng)用經(jīng)CFDA批準(zhǔn)的RT-PCR診斷試劑進(jìn)行新型冠狀病毒核酸檢測(cè)，以保證實(shí)驗(yàn)結(jié)果的正確可靠。RT-PCR反應(yīng)體系和操作參考相關(guān)廠家試劑盒說(shuō)明。每一次RT-PCR反應(yīng)均應(yīng)當(dāng)設(shè)置陰性對(duì)照、陽(yáng)性對(duì)照和無(wú)模板空白對(duì)照，以確保擴(kuò)增體系工作正常。
　　五、實(shí)驗(yàn)室生物安全
　　實(shí)驗(yàn)室安全級(jí)別參照最新版《新型冠狀病毒實(shí)驗(yàn)室生物安全指南（第二版）》的相關(guān)內(nèi)容進(jìn)行管理。采集的環(huán)境樣本屬于未經(jīng)培養(yǎng)的感染性材料，在采用可靠的方法滅活前進(jìn)行的病毒抗原檢測(cè)、血清學(xué)檢測(cè)、核酸提取、生化分析，以及臨床樣本的滅活等操作，應(yīng)當(dāng)在生物安全二級(jí)實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行，同時(shí)采用生物安全三級(jí)實(shí)驗(yàn)室的個(gè)人防護(hù)。環(huán)境樣本在采用可靠的方法滅活后進(jìn)行的核酸檢測(cè)、抗原檢測(cè)、血清學(xué)檢測(cè)、生化分析等操作應(yīng)當(dāng)在生物安全二級(jí)實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行。
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　　附表：新型冠狀病毒環(huán)境檢測(cè)標(biāo)本送檢表
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附表

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新型冠狀病毒環(huán)境檢測(cè)標(biāo)本送檢表

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　　市場(chǎng)名稱：??????送樣單位（蓋章）：??????送樣日期：????年???月???日?送樣人：?????

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　　樣本名稱：可以用拼音首字母表示，如冰箱用BX表示；樣本類型包括：物體表面、手部表面、食品樣本；樣本名稱備注：對(duì)拼音首字母進(jìn)行注釋說(shuō)明，如BX備注為冰箱